Diabetologia：转录但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次成现去甲自身肝细胞到成现1型式白血病医学疼痛的方面部将在成年人初就有比较好的叙述，多个去甲自身肝细胞HIV的成年人里有70%在血清转换后10年内入院白血病，而随访15年的成年人这一比例减低到84%。来得之下，占多数医学1型式白血病一半以上的型式1型式白血病的得病第一组态还没有给予更进一步的学妖术研究。

越来越多的人开始运用于分期系统对来定义1型式白血病的方面：生殖在成现多种去甲自身肝细胞时带入第1过渡期，成现血压诱发时带入第2过渡期，成现疼痛时带入第3过渡期。一些多发去甲自身肝细胞HIV的生殖，在1期和2期，方面很慢速，并发展为得病的1型式白血病。我们之前叙述了一第一组在首次探测到多种去甲自身肝细胞试样后非常寡10年无白血病的近于慢速方面者，这第一组病患者人口数寡，但相似性非常明确。随后，我们辨认出去甲自身肝细胞依赖性CD8+T细胞核加成在方面平稳的病患者里前提不依赖于，但在近期得病和值得注意的白血病病患者里很较难探测到。这可能表明，与方面病患者来得，这些病患者自身免疫加成的调节加强。

早期学妖术研究表明，尽管调节性T细胞核(Treg)量正常，但白血病病患者依赖于一些功用局限性，其里以外对IL-2的加成能力降低。此外，白血病病患者里的现像CD4+T细胞核可能对调节更为具抵抗性，展现为现像T细胞核的消除消散，自然转化成的Treg和纤外转化成的正向Treg，以及肝细胞个人经历的CD4+T细胞核里IL-2加成消散。本学妖术研究的借以是叙述了CD4+调节性T细胞核(Treg)在群集近于平稳方面者里的相似性，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX学妖术研究是一项以这群人为基础的侧向学妖术研究，在21岁以下出院的病患者亲人里检查1型式白血病的脆弱诱因。我们之前叙述了长期以来平稳方面者的相似性，他们保证多重去甲自身肝细胞HIV超过10年，但没有成现白血病的医学疼痛，慢速性或非完成性自身免疫。随后，10名继续保证无白血病并愿意提供者大量血液试样的平稳方面者纳入T和B细胞核功用统计分析。在现在的学妖术研究里，8名慢速方面者(SP第一组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的去甲自身肝细胞HIV。所有的参与者都保证稳定1型式白血病方面的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身肝细胞对某些肝细胞的HIV加成，然而，一名病患者已经保证稳定2期非常寡6年，但没有成现医学疼痛，一名病患者被诊断为白血病，该受测者72岁，在采集实验试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在生物信息学里对该NADP完成了单独安全性评估。分离出来外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多归一化流式细胞核妖术和T细胞核消除试验安全性评估NADP里Treg的频带、特异性式和功用。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、并不一定和回归)完成无监理聚类统计分析，安全性评估Treg特异性式。

结果：与卫生NADP来得，来自慢速方面纤的心灵CD4+T细胞核的监理聚类辨识，应以答的心灵CD4+ Treg频带减低，与糖皮质激素正向的TNFR就其受纤(GITR)表述减低有关。一名HbA1c升高的病患者与方面平稳者和归一化的对照第一组来得，Treg谱略有各有不同。功用统计分析表明，与卫生NADP来得，来自平稳方面纤的Treg介导的CD4+现像T细胞核消除明显受损。展现为对现像CD4+T细胞核CD25和CD134表述的消除减低。

绘出1 险恶的特异性式统计分析辨识，CD4+Treg亚型式在慢速方面配置文件里减低。由FlowSOM生成的Treg一楼，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标明物表述鉴定成10个元簇:心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)运用于9个各有不同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个终端都是一个一个大(100个一个大)，很大的元一个大(10个元一个大)在终端第一组周围上色。每个终端里的饼绘出问到单个标明的表述级别。(b)每个元聚类的热绘出，以辨识整纤标明表述。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)生成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相相当原子量为每个metacluster箱内两条路线绘出(原子量> 0.05%)未确定为HD和SP第一组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞核(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞核(l)。紫色圆点都是捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 运用于CITRUS的预测模型式证实，Treg频带的减低是方面平稳的徽章。AO奈斯(a - f)和柑橘统计分析(g-k)相当SP参与者和归一化的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞核上的关联性。(a)特异性式CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个纤的都是性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR表述完成分离出来，模拟FlowSOM个纤。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)第一组以及NADPSP 606(紫色)里CD25+ cd127的频带概要绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的箱内两条路线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头突成的簇被识别为SP和HD配置文件二者之间的各有不同。(j)箱内两条路线绘出辨识了在SP(虎纹)和HD(灰点)第一组里，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相相当原子量(比例)。(k)直方绘出辨识每个簇的特异性式(粉红色)和Treg标明相相当表述与背景表述(蓝色);上列，磁盘Treg_3;前面偷偷地，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇里标明的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验

绘出3 与卫生献血者来得，方面平稳者心灵treg的GITR减低。每个心灵CD4+T细胞核元簇(心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表述标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表述热绘出(sp606不以外在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇里所有HD(黄褐色)、所有SP(蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表述串接，辨识直方绘出(c)和概要绘出(d)。Wilcoxon相加符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有NADP以外，p< 0.05(蓝色)NADPSP 606和归一化的HD不以外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表述，从AO奈斯，从所有HD(黄褐色)、所有SP(蓝色)和SP 606(紫色)串接，辨识直方绘出(e)和概要绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加符号秩检验

绘出4 来自平稳方面的CD4+ treg细胞核支配现像CD4+T细胞核的能力降低。SP第一组用蓝色的两条路线和圆点问到，HD第一组用黑色的两条路线和圆点问到，紫色的两条路线/圆点问到NADPsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标明为CFSE, Treg按捕捉到的比例指示剂。用抗CD3 /28微珠再造细胞核，培育3紧接著完成流式细胞核妖术探测。(a-d)与CD4+反之亦然者相相当应以的treg培育(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培育。(a,b,f) CFSE消除(a,e)和CFSE消除比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除比例。运用于HIV对照(应以答的自发细胞核含treg)计算消除比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

绘出5 现像CD4+T细胞核对平稳方面的T细胞核再造的消除更为敏感。SP第一组用蓝色的两条路线和圆点问到，HD第一组用黑色的两条路线和圆点问到，紫色的两条路线/圆点问到NADPsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标明，treg按捕捉到的比例指示剂。用抗CD3 /28微珠再造细胞核，培育3紧接著完成流式细胞核妖术(CD25反染)和细胞核因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培育。(a,b) CFSE消除(a)和CFSE消除百份(b)。(c,d) CD25消除百份(c)和CD134消除百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

结论：我们得成的结论是，来自平稳方面子的再造心灵CD4+Treg在GITR表述里给予了扩大和丰富，强调了进一步学妖术研究Treg在1型式白血病安全性生殖里的异质性的必要性。

原文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28